武汉恒信世纪科技有限公司为您提供专业的色谱产品和新闻资讯,敬请关注!

血浆蛋白粉中免疫球蛋白G的含量的检测

发表时间:2019-08-16 13:32

   今天去给客户安装了液相色谱仪,客户主要用它来检测血浆蛋白粉中免疫球蛋白G的含量,对于液相色谱仪安装已经有一些小小经验,所以仪器送到之后很快的我们就把仪器安装好了,仪器安装好之后呢肯定是要调试和验收的,验收中的安装已经完成,接下来我们运行确认和性能确认,既然要检测血清蛋白,那我们就通过检测它来完成后面的任务吧。首先我们完成运行确认,准备我们实验需要的流动相,流动相A:称取5.6765g磷酸氢二钠和4.6478g磷酸二氢钾至1000mL容量瓶中,加水定容至l000 mL,配制成pH-6.5,浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液。流动相B:称取甘氨酸3.7535g与1000mL容量瓶中,加入800 mL水溶解,再加入4.75 mL6 mol/L的盐酸,用水定容至1000 mL,配制成pH-2.5,浓度为0.05 mol/L的甘氨酸盐酸缓冲液。将两种流动相经过过滤和脱气处理后,连接到我们的输液泵上,输液泵在第一次使用时要打开排液阀,将注射器安装到废液口,用注射器进行手动吸液当衍生试剂进入注射器内,观察并确定进液管内无明显气泡后关闭排气阀,换上废液管后开始运行输液泵。此时必须要确定泵腔内有液体且无气泡才可以运行泵,否则运行泵时会损坏泵头。两个泵都要经过此操作后才可以开始运行。打开我们的泵,查看机器是否可以顺利通过自检,检测泵的流速和流动相混合比例的准确度。随后打开检测器和工作站,我们用的色谱柱是HiTrapTM   Protein G柱,1mL。让流动相冲洗整个系统,查看基线,等待基线平稳。

   在这该阶段我们可以把标准品配制出来,首先我们来了解一下免疫球蛋白G,它是血清主要的抗体成分,占血清免疫球蛋白的百分比较多,大约占75%,但它只有40%-50%在血清中,其余在组织当中。它的主要功能是在机体免疫中起到保护作用,它也是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白。通过胎盘获取的母体免疫球蛋白G在出生后数月对防御白喉、麻疹、脊髓灰质炎等感染起着重要作用。它的结构想一个“Y”字型,如图:

称取免疫球蛋白G标准品0.0102g(纯度=97%)置于10mL容量瓶,并用流动相A定容到10mL,摇匀,脱气。浓度为1mg/mL。取配置好的标准溶液母液,用流动相A稀释成浓度为0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL的标准工作液。基线稳定后设定好实验参数:流动相梯度洗脱程序

   检测波长280nm,进样量20μL。检测进样阀的精密度:将标准溶液母液取20μL进样,连续进样6次,计算其相对标准偏差RSD=0.94%。依次进样标注品工作液20μL,由时间进行定性,峰面积进行定量。得出其平均相关系数r=0.9999。免疫球蛋白G检出质量浓度以3倍信噪比(s/N=3)计算,最低检出质量浓度为0.1 mg/mL。原本还有一步已知浓度样品的检测,前处理方法如下:称取0.1g精确至0.0001曲血浆蛋白粉于15mL的塑料离心管中,准确加入10mL流动相A,涡旋振荡10min,4 000 r/min离心5 min,取上清液经微孔膜(0.22μm)过滤,滤液待测。但是由于今天已知浓度的样品没有到,所以我们无法进行样品进样,但是建议大家在安装仪器时最好用已知浓度的样品进样验证仪器的准确性。好了,今天就到这里啦!