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色谱柱常见故障与解决方法

发表时间:2019-10-10 11:45

现象

可能的原因

解决方法

柱压升高

色谱柱入滤片被流动相或样品中颗粒堵住。

卸下入口接头的滤片,使用11的硝酸溶液超声清洗5min,再用水、甲醇清洗除去水份。
样品及流动相使用045µm滤膜除去微量杂质。

样品组分在滤片上沉淀堵住滤片。

使用流动相作溶剂配制样品。

新柱柱效低

柱外死体积大。

更换连接管,重新连接色谱柱,降低死体积。

样品在流动相中溶解不好,影响传质过程。

使用合适的流动相或使用流动相溶解样品。

新柱接到仪器上后,柱头漏液。

柱接头与仪器之间连接管的压环变形量不够。

用扳手顺时针方向拧紧14圈直到不漏液为止。

新柱接到仪器上后,启动仪器没有柱压降。

柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干。

继续开泵,用流动相将柱内气体置换掉。

新柱接到仪器上后,检测器出口不断有小气泡出现。

柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干

继续开泵,用流动相将柱内气体置换掉。

流动相脱气不彻底特别是MeOHH20体系由于氢键作用很容易出现气泡。

配好流动相后一定要进行脱气处理。

新柱接到仪器上后柱压降不断增加,甚至超过仪器的耐压限。

柱入口滤片被固体颗粒堵塞(或被毒菌堵塞)

更换或清洗柱入口滤片

045µm过滤膜过滤流动相除去微小颗粒物。

进样次数增加柱压降逐渐增加。

样品中含有不溶于流动相的微小颗粒物。

045µm过滤膜过滤样品。

样品在流动相中析出微小结晶。

推荐使用流动相溶解样品。

使用段时间后,柱效下降,分离不好。

柱填料被流动相溶解而流失。

推荐使用予柱。如柱床层塌陷,用相同型号填料填补。

柱填料被样品杂质污染。

推荐使用保护柱或用强溶剂冲洗色谱柱除去污染杂质。

柱使用一段时间后,柱效下降出现双峰。

柱入口床层被污染使柱填料变质。

用强溶剂冲洗除去杂质。

柱使用段时间后,柱效下降,出现峰拖尾。

柱入口床层被污染。

用强溶剂冲洗20-30ml,若效果不明显应废弃。

柱使用一段时间后保留值逐渐缩短。

柱中固定相流失所致。

更换色谱柱。
检查所用的色谱条件是否合适。

旧色谱柱柱效低,分离不好,柱入口床层塌陷。

填料被流动相溶蚀而流失。

用同型填料填补柱效可部分恢复。
对硅胶质填料,流动相PH值在2—7范围内,否则可能被溶蚀。

旧色谱柱柱效低分离不好,有时出现双峰。

入门填料被污染变质所致。

用强溶剂冲洗。
刮除被污染的床层,用同型的填料填补柱效可部分恢复。
污染严重,则废弃或重新填装。

进样量增大与峰面积增加不成正比.即进样量与峰面积不是线性关系。

样品在流动相中的溶解度小,只有部分样品被流动相冲如色谱柱中而另一部分则沉积在柱人口端。

用流动相溶解样品。
样品的浓度不宜太大。
进样量不宜过大。

使用缓冲液作流动相时,柱压降升高很快。

霉菌生长所致。

在流动相中加入有毒物质或加叠氯化钠防止霉菌生长。
实验结束后先用纯水后用MeOH各冲洗20-30ml后关机。

5µm颗粒填料柱时, 以MeOHH20作流动相柱压较高。

MeOH与水之间由于氢键作用黏度增大。

可用乙腈/水体系使柱压降低,分离效率更好。

长时间放置的色谱柱,出现双峰。

柱床层出现干裂。

柱放置时,最好使用相应的溶剂充填好,防止受大的机械震动,如床层干裂应废弃掉。

流动相洗涤强度由弱渐强时出现很多杂质峰。

强溶剂将弱溶剂洗不出的杂质冲出来。

不影响柱的性能。

U V色谱图中,靠近死时间处出现负峰。

进样时压力波动所致。

采用阀进样。

样品溶剂比流动相的UV吸收值低。

用流动相溶解样品